HPLC柱性能的恢复

HPLC柱能够在运行几个月后提供高度可重复的性能运行。然而，它具有有限的寿命，并且在一段时间内，其性能开始恶化，如上所述峰值形状的扭曲以及它们之间的分辨率，柱背压力的不稳定增加和鬼峰的出现。这种异常可以通过采用推荐的修复方法和高效液相色谱柱保养。

如果由于过载或使用不兼容的移动阶段，则可以恢复列，而且无法恢复损坏的栏目，也无法恢复其使用的生命，并且需要更换。

列恢复程序

反向阶段列

反相分离是大多数HPLC分离中使用的主要操作方式。填料主要由C18、C4、CN、NH2和苯基固定相组成。建议按照所示顺序用10到20体积的溶剂进行洗脱

• 水
• 乙腈
• 异丙醇
• 庚烷
• 异丙醇
• 乙腈
• 移动阶段

用于准备参考的HPLC柱的共同尺寸的平衡时间：

柱尺寸	流量	时间
250x 4.6mm.	1ml / min.	60分钟
150 x 4.6毫米	1ml / min.	30分钟

反相(蛋白质/肽分离)

• 用20卷没有缓冲的移动阶段齐平
• 0.1％TFA在水中
• 组织0.1%乙腈/异丙醇(1:2)
• 最后与待用的流动相平衡

正常相位

• （氨基，二醇，硝基，氨基固定阶段）
• 用20卷冲洗
• 庚烷
• 异丙醇
• 乙腈
• 水
• 异丙醇
• 庚烷

离子交换柱

离子交换柱，包括阳离子和阴离子交换剂，如SAX，SCX，WAX，WCX。

• 在pH 7时，20体积为500mM磷酸盐缓冲液
• 10%醋酸
• 5卷水
• 在pH 7时10体积的磷酸盐缓冲液
• 5 volumes水
• 10体积的甲醇
• 10卷水
• 移动阶段

GPC / GFC列

• 在pH3的5个磷酸盐缓冲液中的5柱体积
• 如果使用强保留的蛋白，则使用60分钟的梯度从水中加入乙腈到水。

贮存

在没有立即使用柱子后，建议以下存储程序：

• 过夜 - 可以存储在最后使用的流动阶段
• 2-3天至一周 - 用水冲洗以防止微生物生长
• 长期储存（几个月） - 储存在乙腈等质量溶剂中。

使用前验证

即使在再生后，通过验证其性能参数(如等效于理论板的高度、不对称系数和使用标准复方注射剂的保留时间)来验证恢复柱的性能也是很重要的。