高效液相色谱柱的保养

一个高效液相色谱柱是最关键的组成部分高效液相色谱法系统。结果的质量很大程度上取决于它的性能。虽然可以通过跟踪理论板的数量来监测HPLC柱条件,但建议您寻找其他迹象,如:

  • 峰形退化
  • 留存时间的变化
  • 背压突然增加
  • 峰间分辨率差
  • 鬼峰出现
高效液相色谱柱
高效液相色谱柱

通过在处理、使用和存储方面遵守推荐的指导方针,有可能延长您的HPLC柱的使用寿命

处理

  • 避免跌落等机械冲击。冲击常常导致窜槽,从而导致峰值尾迹
  • 在推荐的压力范围内操作高效液相色谱柱。压力过大会导致与机械冲击相同的问题
  • 只使用兼容的螺母、套圈和配件。不兼容的配件可能导致泄漏和柱螺纹损坏
  • 不要过度紧固末端配件
  • 千万不要把色谱柱当作搅拌杆来搅拌流动相和缓冲液。

使用

  • 安装高效液相色谱柱,使流动方向与箭头方向一致
  • 流动相应在使用前进行脱气,并使用0.45 μ m过滤器进行过滤。此外,在流动相储层中使用在线过滤器。
  • 使色谱柱与与生产厂家储存溶剂(异丙醇)相容的流动相相平衡。使用至少5 - 10卷的平衡流动相
  • 储存之前,冲洗色谱柱,清除残留的缓冲液或离子配对剂。这是必不可少的防止降解或缓冲盐沉积干燥。
  • 硅基色谱柱的推荐pH值范围为2.0 - 7.5。一些色谱柱的pH值范围为1- 11,但为了安全操作和长色谱柱寿命,您应该尽可能在2.0-7.5 pH范围内使用它
  • 改变流动相时,溶剂的选择应按极性逐步进行。避免剧烈的变化或极端的梯度。
  • 如果出现过大的背压,可以使用反向冲洗
  • 在注射前通过0.45或0.2 μm过滤器过滤所有样品
  • 用户保护柱之间的注入器和分析柱,以防止污染物和微粒到达柱
  • 使用流动相溶解样品,如果不可能,则应使用另一种溶剂或极性相容的溶剂的混合物
  • 不要超过规定的温度限制,为了结果的一致性,使用柱式烤箱

存储

  • 高效液相色谱柱应在环境温度条件下保存,不要放在冰箱或烤箱中
  • 储存条件视乎使用的时间间隔而定:

短储存数小时至过夜-可使用与上次分析相同的溶剂。

中等间隔储存(两天到周末)-用纯净水冲洗,防止微生物或霉菌生长。

长期贮存使用洗脱液,其含水量不应超过50%。

  • 使用后不建议使用肥皂或洗涤剂溶液清洗柱。
  • 不能使用强酸或强碱,因为它们会造成完全不可逆的损害。
  • 储存时,端塞应紧密贴合,防止溶剂蒸发导致固定相干燥

我们希望您发现这些指南有助于获得高质量的结果,并增加您的专栏的使用寿命。请留下你的评论,分享你的任何经验。

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反应

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  1. 在生物分析中使用的色谱柱的条件是什么
    因为这些列必须储存在4到8°c之间

    谢谢你!
    护士:对不起,我的英语不是很好

  2. “中等间隔储存(两天到周末)-用纯水冲洗,以防止微生物或霉菌的生长”为什么水可以防止微生物的生长?特别是在室温下,相反,有机溶剂阻止微生物生长。

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