如何在HPLC分析前去蛋白生物液?

脱蛋白作用的作用范围不断扩大高效液相色谱法生物液体分析。HPLC分析前样品过滤。样品过滤在液相色谱分析中的重要性强烈建议延长柱的寿命和减少维护费用，从而有助于增加实验室的吞吐量。

除过滤外，对血浆、血清、尿液和脑脊液等生物液体进行脱蛋白分析，以确定抗生素、残留农药和精神药物的水平也是必要的。蛋白质需要沉淀并从样品中去除，否则这些会导致柱性能的恶化

除蛋白技术

变性-加热使大多数蛋白质变性，加热后变性的颗粒被离心除去。

化学沉淀-比加热更有效，因为对温度敏感的化合物会在加热过程中恶化。用三氯乙酸酸化，离心，氢氧化钠中和，去除99%的蛋白质。也可以使用全氯乙酸。这两种酸都有一些缺点。三氯乙酸在230 nm以下具有较强的吸收能力，而全氯乙酸则在溶液中留下盐类，可与有机溶剂沉淀或对紫外检测器的基线噪声有影响

乙腈的治疗-乙腈是一种普通溶剂，在190nm以下透明。血浆样品与乙腈混合离心后，会沉淀出约95%的蛋白质。非极性蛋白质如白蛋白保持在液相中。如果用保护柱去除平衡的5%蛋白质，上清液可以直接注入。长期使用时，需更换护柱或倒置冲洗，防止蛋白质进入主柱。

在线除蛋白

一般情况下，在加入酸或有机溶剂后，进行脱机脱蛋白，然后离心即可。然而，为了节省时间，自动化在线脱蛋白是可取的。一些仪器供应商提供专门的配件，主要包括一个预处理柱:填充亲水聚合物涂层。大分子蛋白质被保留，而分析物被引到主柱。

我们已经看到，脱蛋白质扩大了生物流体的高效液相色谱分离的应用，这些流体是复杂的基质，如果不使用该技术，对这些流体的高效液相色谱估计将是困难的，甚至是不可能的。

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