生成可靠HPLC结果的重要建议

高效液相色谱在分析研究和质量控制实验室中有着显著的存在。有关生产工艺和研究结果发表的重要决策都是基于决策的，这些决策只有在HPLC系统产生的数据具有高度可靠性时才能得出。

高效液相色谱是一个多组分系统，因此结果的准确性和可靠性取决于每个组分的性能水平。本文提出了一些建议，有助于提高结果的真实性。为简单起见，在单独的标题下讨论每个组件的贡献。

流动相

流动相的主要作用是将进样样品携带到柱中，在柱中分离后将各组分转移到检测器进行识别和定量。理想情况下，在分析开始之前应该准备一个新的流动阶段高效液相色谱法应使用级溶剂。溶剂中应无任何悬浮颗粒。首先使用0.45 μ过滤器在真空下过滤溶剂。建议进一步使用在线过滤器去除任何残留的悬浮颗粒。流动相溶剂应完全相互混溶，进样样品也应混溶。当使用缓冲器作为流动相组件时，绝不允许缓冲器在系统内部干燥，因为干燥时形成的盐会沉积，除了损坏泵组件外，还会阻碍流动相的自由流动。

样本

和流动相溶剂一样，进样前对样品进行过滤是一个很好的做法。大容量注射将导致峰值形状变形，因此不应通过大容量注射超载柱。每当要开发一种新方法时，建议检查样品与流动相的兼容性。如果溶解度低，试着使用与流动相混合物极性相匹配的溶剂或溶剂组合。

列

色谱柱是高效液相色谱系统的关键组成部分。它的适当小心和使用将有助于提供高可靠性的结果。

操作流量和压力应逐渐改变，这样的变化不会扰乱固定相填料。使用保护柱也将防止杂质进入主列。由于流动相的流动取决于温度，因此强烈建议使用柱箱，以保持恒定的柱温以保持流速的一致性。

泵

该泵需要提供流动相流动的一致性，并在整个分析运行中保持溶剂组成。在进行梯度分析时，需要泵按照软件程序来维持流动相的组成。这样的条件是通过防止损坏泵部件，并在发现任何可见的损坏时及时更换这些部件来实现的。根据情况，可使用中极性溶剂或纯水冲洗泵。

注射器/ autosampler

注射量的一致性是结果重现性的首要要求。手动注射器包括固定体积的样品循环，在自动模式下，注射注射器保持体积的一致性，无需操作人员干预。

需要特别注意防止以前分析的污染。如果是手动进样器，总是用足够的样品冲洗进样回路，如果是自动化系统，确保中间洗涤循环是分析程序的一部分。在分析开始之前，对样品和标准可重复使用小瓶的清洁度进行验证是至关重要的。

光源

大部分的高效液相色谱分析都可以在紫外光源下进行。这种光源的使用寿命很长。根据供应商的建议更换灯具，将有助于提高吸光度值的可重复性。

探测器

检测器是高效液相色谱系统的最终部分，它可以确认不同样品成分的存在，并有助于它们的定量。

建议定期脱机清洗检测器，用水和流动相冲洗后再使用。操作压力范围不应超过，以防止可能对探测器细胞壁造成的损害。

文章中提出的建议肯定会提高结果的质量，但毫无疑问，没有什么可以替代对参比化合物进行系统的周期性校准。