如何混合高效液相色谱流动相溶剂以保证结果的一致性?
单一溶剂很少能满足使用分离的要求高效液相色谱法.在大多数情况下,需要混合两种或两种以上的溶剂。在等临界操作中,成分是预先确定的,并且在分析运行期间保持不变。另一方面,在梯度洗脱中,最终的溶剂组成与最初的组成有很大的不同,并在分析过程中编程改变。
在等临界模式下,制备了溶剂混合物,并进行了离线混合离线混合高效液相色谱流动相溶剂的注意事项讨论了各溶剂的物理性质对混合的作用。本文讨论了采用相同的混合方法以确保结果的一致性的重要性。
化学计量混合是一个很少实现的目标。即使消除了体积测量误差,混合的热也妨碍溶剂的精确混合。在溶剂的物理混合过程中,以热形式存在的能量要么被吸收,要么被释放出来。这导致温度的变化,从而导致混合溶剂的体积的变化。甲醇和乙腈是两种常用的溶剂高效液相色谱法分离。甲醇与水混合后产生的热量会增加甲醇与水混合后的体积。另一方面,乙腈与水的混合会吸收热量,导致混合体积的冷却和收缩。这种成分的变化导致混合物的极性发生明显的变化,这种变化在样品分子的分离特征上也有明显的变化。
溶剂混合方法
混合溶剂是一种很容易掌握的基本操作。两种常见的混合做法是:
单独的体积测量
例如,假设你需要准备一升甲醇和水的混合物,其中有60%的水和40%的甲醇。在这种方法中,在量筒中测量600毫升的水,并将其转移到混合烧杯中。接下来在量筒中计量400毫升甲醇,并转移到混合烧杯中的水中,搅拌混合物,使其均匀混合。由于混合的热量,温度上升会导致最终体积超过1000ml。
混合体积的组成
在这个方法中,你将测量600毫升的水在一个量筒,然后用甲醇标记到1000毫升。然后将总体积转移到搅拌烧杯中进行均匀搅拌。
理论上这两种方法都满足混合溶剂的要求,但两种方法的体积变化是不同的。因此,为了分离的一致性,采用相同的混合方法是重要的。在缓冲液中,在与有机相混合之前,在水相中调整pH值。
在在线混合的情况下,纯粹的移动脸保存在单独的瓶子和在pomp比例阀的帮助下按照所需的比例混合。通过软件对混合热进行修正后,接近化学计量混合是可能的。
希望这篇文章能够强调每次采用相同的混合程序的必要性。请展示和分享您的意见,并提供您宝贵的意见。
喂Bhanot博士。首先非常感谢您关于高效液相色谱的有用和有趣的帖子。我有一个问题,关于混合溶剂的话题在等民主的方法:什么是更好的,混合他们离线或在线?我了解到,由于温度和体积变化的影响,可能会严重影响色谱和长期损坏泵等,离线时更适合。然而,另一种方法是,泵比人更准确的混合,因此等度高效液相色谱将执行混合溶剂在混合室。提前非常感谢您!
非常感谢加西亚感谢我们的努力。在线混合优于离线混合,因为它的准确性。现代系统上的软件会补偿音量的变化(如果有的话)。温度的变化并不显著到足以影响色谱或损坏任何内部成分。