离子对色谱 - 通过反相HPLC分离高极性分子的可行替代方案

离子对色谱法使用流行的反相色谱法分离带电的分析物。改变流动相比或固定相对提高峰形和保留时间没有太大帮助。

该技术由Gordon Shill博士于1973年开发。离子配对试剂在非极性链的末端具有离子末端官能团。将试剂加入到流动相中并给定足够的时间与柱平衡。链条的非极性端部强烈地保持在非极性静止阶段，而带电的端子粘在流动相中。流动相中相反电荷的离子制品通过试剂上的电荷而固定，导致样品分子和试剂之间的中性离子配对。这有助于在反向相位的分析物中选择性保留充电HPLC.。

离子交换色谱已经存在几年，但引入离子对色谱，提供了几个优点：

• 简单的缓冲剂制备
• 广泛选择碳链长度，以改善保留和分离
• 显着降低分离时间
• 电离和非电离分子的同时分离
• 结果高再现性
• 改善峰形状

酸性样品的分析是通过在流动相中加入季铵盐如四丁基氯化铵进行的

\（rcoo ^ - + r'_4n ^ + \ lightarrow rcoonr'_4 \）

类似地，带负电荷的试剂，如烷基磺酸，可以用来选择性地保留带正电荷的离子碱

\（rnh_3 ^ + + r'so_3 ^ - \ lightarrow rnh_3o_3s-r'\）

使用离子对试剂的注意事项：

• 选择的离子对试剂应缺乏选择用于分析的UV或荧光波长区域的吸光度
• 在使用离子对试剂时，应精确控制流动相组成和温度，避免梯度洗脱
• 允许移动阶段足够的时间与柱平衡，从而使流动相或温度的变化最小化
• 与离子对剂一起使用的柱应该专用于这种分析，因为即使在繁殖后，难以完全冲出离子对试剂

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