缓冲液在反相HPLC分离中的作用
极性和可电离化合物的反相分离需要精确的控制pH值使用缓冲区。这确保了可重复的保留时间和自由免受峰值保留时间的拖尾和峰的自由。缓冲还可以防止分析物和残留硅烷醇对固定相之间的相互作用。
反相分离可以方便地在pH范围2.0-7.5中进行。然而，如果pH维持在缓冲离子的PKA值的+/- 1 pH单位内，则达到结果的再现性。对于参考文献，这里给出了常用河口的有用范围：
| 缓冲 | PKA在25岁0.C | pH范围 |
| 磷酸盐 | 2.1 | 1.1-3.1. |
| 7.2 | 6.2 - 8.2 | |
| 12.3 | 11.3 - 13.3 | |
| 醋酸 | 4.8 | 3.8 - -5.8 |
| 硼酸圈 | 9.2 | 8.2 - -10.2 |
| 三乙胺 | 10.8 | 9.8-11.8. |
控制缓冲区选择的因素
UV截止值
缓冲选择应基于检测波长的透明度。常用的缓冲器的UV截止率从约230nm到200nm以下。
与流动阶段的兼容性
缓冲区应与移动阶段兼容。这些不应该沉淀成沉淀地层可能对泵和色谱柱造成无法弥补的损伤。
使用LC - MS系统的缓冲选择
随着缓冲区应具有高波动性，缓冲区的选择受LC - MS应用程序的限制。磷酸盐缓冲液不适合于此目的。常用的是铵盐，例如乙酸铵pH 2.0-3.8，铵甲酯pH 2.7至3.7和碳酸铵pH6.6至8.6。
缓冲浓度
增加缓冲液浓度可使极性分子洗脱速度加快。这可以用来解决共洗脱峰，但较高的浓度增加粘度，导致高柱背压。
硅基色谱柱即使在pH 7.0以下也会溶解，当与有机溶剂混合在高浓度时，溶解性成为一个问题。浓度低于0.005M通常使缓冲液无效。浓度范围为10至50毫米通常是足够的大多数应用。一般来说，有机溶剂的用量不应超过50%。
推荐的缓冲液制备顺序
- 把粉末溶解，使体积达到要求。
- 应在与有机培养基混合之前进行pH调节
- 用0.45 μm滤膜过滤分析HPLC.UHPLC应用程序的0.22μm
使用缓冲液时的基本预防措施
- 缓冲液是微生物生长的良好培养基。尽可能准备新鲜的溶液，并设定较短的有效期。
- 使用具有相同比例的水 - 有机溶剂混合物的缓冲器冲洗系统，然后用纯水然后储存溶剂。如果系统长期仍然不使用
现在，您已了解缓冲区控制在反相分离中的重要性，请留下您的问题和评论本文的内容。
亲爱的Depauk Bhanot博士，
我写信给你，以便询问有关您世界支持计划的一些细节。
我需要一些关于高效液相色谱紫外检测器测定抗生素(大环类)的信息。
我可以请你指导我吗？
我期待着你的消息。
此致
亲爱的Nafise,
利用紫外-可见二极管阵列探测器在不同波长同时测定了不同食品中的大环内酯类化合物。根据您的要求和应用，您必须参考一些色谱期刊来开发您自己的测试条件。
问候
先生，
如何将我的分离物与来自HPLC回收的粘性液体的缓冲液（三乙醇胺）分离出来
我的建议是使用其他一些缓冲媒体，因为粘性媒体将导致缩短列的使用寿命。缓冲介质应该自由流动。
它很有用。请继续写作。